Diabetologia：激活但功能受损的潜意识Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次再次出现人体内自身抗质到再次出现1改进型癌症流行病学病因的实质性赴援在儿童时期就有不太好的揭示，多个人体内自身抗质感染性的儿童先前有70%在血清变换后10将近中风癌症，而随访15年的儿童这一人口比例增高到84%。远比之下，占流行病学1改进型癌症一半以上的改进型1改进型癌症的发作机制还没得到应有的学拳法研究。

更加多的人开始用到分期管理系统来表述1改进型癌症的实质性：个质在再次出现多种人体内自身抗质时离开第1先决条件，再次出现血糖异常时离开第2先决条件，再次出现病因时离开第3先决条件。一些多发人体内自身抗质感染性的个质，在1期和2期，实质性较慢，并转改进型为发作的1改进型癌症。我们先前揭示了一两组在首次检查到多种人体内自身抗质抽样后至不及10年无癌症的变慢实质性者，这两组病征人数不及，但完全相同之处极其明确。随后，我们推测人体内自身抗体特异性CD8+T细胞核子反应在实质性较慢的病征先前必需不依赖于，但在近期发作和长期依赖于的癌症病征先前很容易检查到。这可能表明，与实质性病征远比，这些病征自身免疫反应的缓冲增强。

早期学拳法研究表明，尽管缓冲性T细胞核子(Treg)数量短一段时间，但癌症病征依赖于一些机制缺陷，其先前包括对IL-2的反应能力下降。此外，癌症病征先前的不稳定性CD4+T细胞核子可能对缓冲更具抵抗性，体现为不稳定性T细胞核子的依赖性减弱，自然转化成的Treg和质外转化成的诱导Treg，以及抗体经历的CD4+T细胞核子先前IL-2反应减弱。本学拳法研究的目的是揭示了CD4+缓冲性T细胞核子(Treg)在一小群以致于较慢实质性者先前的完全相同之处，他们的同期为43岁(31-72岁)，随访一段时间为18-32年。

方法：BOX学拳法研究是一项以人群为基础的纵向学拳法研究，在21岁以下确诊的病征亲属先前检查1改进型癌症的危险因素。我们先前揭示了长期较慢实质性者的完全相同之处，他们保持多重人体内自身抗质感染性超过10年，但没再次出现癌症的流行病学病因，慢性或非顺利进行性自身免疫。随后，10名再次保持无癌症并不想提供大量血液抽样的较慢实质性者纳入T和B细胞核子机制研究。在目前的学拳法研究先前，8名慢实质性者(SP两组)，先前位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁密切关系的人体内自身抗质感染性。所有的行动者都正处于1改进型癌症实质性的1期，尽管一些人随后失去了人体内自身抗质对某些抗体的感染性反应，然而，一名病征现在正处于2期至不及6年，但没再次出现流行病学病因，一名病征被病患为癌症，该受试者72岁，在采集测试抽样时，其HbA1c增大到53 mmol/mol(7%)，在数据研究先前对该供质顺利进行了单独评量。分离外周血单个核子细胞核子(PBMCs)，采行多参数流式细胞核子拳法和T细胞核子依赖性试验评量供质先前Treg的频赴援、性状和机制。用到FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和回归)顺利进行无监督聚类研究，评量Treg性状。

结果：与肥胖供质远比，来自慢实质性质的遗忘CD4+T细胞核子的监督聚类辨识，作用于的遗忘CD4+ Treg频赴援增高，与糖皮质激素诱导的TNFR相关肽(GITR)传达增高有关。一名HbA1c增大的病征与实质性较慢者和最简单的相比较两组远比，Treg谱有所完全相同。机制研究表明，与肥胖供质远比，来自较慢实质性质的Treg介导的CD4+不稳定性T细胞核子依赖性明显受损。体现为对不稳定性CD4+T细胞核子CD25和CD134传达的依赖性增高。

由此可知1 全面性的性状研究辨识，CD4+Treg亚改进型在慢实质性队列先前增高。由FlowSOM转化的Treg室，涌进在来自所有供质的活CD4+CD45RA -细胞核子上。根据标示出物传达鉴定出10个元簇:遗忘T细胞核子_1;遗忘T cell_2;遗忘T cell_3;遗忘T cell_4;CD49b遗忘T细胞核子;HLA-DR + GITR +遗忘T细胞核子;内核子Treg_1;内核子Treg_2;内核子Treg_3;和内核子Treg_4。(a)用到9个完全相同Treg标示出转化的10个元簇的MST。每个端口代表一个集群(100个集群)，很大的元集群(10个元集群)在端口两组外围上色。每个端口先前的粥由此可知暗示单个标示出的传达档次。(b)每个元聚类的热由此可知，以辨识整质标示出传达。(c, d)为HD两组(c)和SP两组(d)转化由此可知，以及FlowSOM识别的每个元簇的大块。(e-l)相对数量级为每个metacluster箱子先前央线由此可知(数量级> 0.05%)确定为HD和SP两组:内核子Treg_2 (e),内核子Treg_3 (f),内核子Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +遗忘T细胞核子(h)、遗忘T cell_1(i),遗忘T cell_2 (j),遗忘T cell_3 (k) n d CD49b遗忘T细胞核子(l)。白色边框代表**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon匹配符号秩检验。此键适用于由此可知形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

由此可知2 用到CITRUS的预测模改进型证实，Treg频赴援的增高是实质性较慢的图案。分级旁路(a - f)和柑橘研究(g-k)比较SP行动者和最简单的HD行动者在CD4+CD45RA−T细胞核子上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群质的代表性由此可知。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR传达顺利进行分离，模拟FlowSOM群质。(b) HD(小点)和SP(白斑)两组以及供质SP 606(白色)先前CD25+ cd127的频赴援汇总由此可知。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+旁路有界的箱子先前央线由此可知;(c) HLA-DRloGITR−(内核子Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(内核子Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(内核子Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+内核子T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3传达强度着色，箭头显眼的簇被识别为SP和HD队列密切关系的完全相同。(j)箱子先前央线由此可知辨识了在SP(白斑)和HD(灰点)两组先前，CITRUS遗忘Treg_3和Treg_4的相对数量级(人口比例)。(k)插值辨识每个簇的性状(白色)和Treg标示出相对传达与取材传达(黄色);上列，内核子Treg_3;请注意一行，内核子Treg_4。取材与所有其他簇先前标示出的传达有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon匹配符号秩检验

由此可知3 与肥胖献血者远比，实质性较慢者遗忘treg的GITR增高。每个遗忘CD4+T细胞核子元簇(遗忘T细胞核子_1;遗忘T cell_2;遗忘T cell_3;CD49b +遗忘T细胞核子;HLA-DR + GITR +遗忘T细胞核子;内核子Treg_2;内核子Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检查每个传达标示出的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的传达热由此可知(sp606不包括在内)。(c,d)遗忘Treg_4元簇先前所有HD(粉红色)、所有SP(黄色)和SP 606(白色)的FlowSOM GITR传达相联，辨识插值(c)和汇总由此可知(d)。Wilcoxon匹配符号秩和检验，p< 0.07(白色)所有供质包括，p< 0.05(黄色)供质SP 606和最简单的HD不包括在测试先前。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs先前GITR传达，从分级旁路，从所有HD(粉红色)、所有SP(黄色)和SP 606(白色)相联，辨识插值(e)和汇总由此可知(f) *p< 0.05, Wilcoxon匹配符号秩检验

由此可知4 来自较慢实质性的CD4+ treg细胞核子依靠不稳定性CD4+T细胞核子的能力下降。SP两组用黄色的先前央线和边框暗示，HD两组用粉红色的先前央线和边框暗示，白色的先前央线/边框暗示供质sp606。用到CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞核子顺利进行分选。CD4+CD25−(此番者)被标示出为CFSE, Treg按注意到的人口比例反应物。用抗CD3 /28微珠酪氨酸细胞核子，人才培养3天内顺利进行流式细胞核子拳法检查。(a-d)与CD4+此番者相对应的treg人才培养(自质)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD此番者人才培养。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE依赖性人口比例(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的依赖性人口比例。用到感染性相比较(作用于的响应细胞核子含treg)计算依赖性人口比例。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

由此可知5 不稳定性CD4+T细胞核子对较慢实质性的T细胞核子酪氨酸的依赖性更敏感。SP两组用黄色的先前央线和边框暗示，HD两组用粉红色的先前央线和边框暗示，白色的先前央线/边框暗示供质sp606。用到CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞核子顺利进行分选。CD4+CD25−(此番者)被cfsel标示出，treg按注意到的人口比例反应物。用抗CD3 /28微珠酪氨酸细胞核子，人才培养3天内顺利进行流式细胞核子拳法(CD25反染)和细胞核子因子研究。HD Treg与HD、SP或sp606此番者协同人才培养。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE依赖性百份(b)。(c,d) CD25依赖性百份(c)和CD134依赖性百份(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共人才培养先前的传达。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

得出结论：我们得出的得出结论是，来自较慢实质性子的酪氨酸遗忘CD4+Treg在GITR传达先前得到了扩张和珍贵，强调了全面性学拳法研究Treg在1改进型癌症风险个质先前的异质性的更全面性。

出处典故：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28