Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中日益扩展

从第一次再次出现肝细胞自身抗本体到再次出现1型号乳癌针灸病征的方面不下在成年人时期就有很好的详细描述，多个肝细胞自身抗本体阴性的成年人里面有70%在血清转换后10年底患上乳癌，而随访15年的成年人这一比不下提高到84%。相对于之下，占针灸1型号乳癌一半以上的型号1型号乳癌的复发机制还从未获得必要的科学研究。

越来越多的人开始用到应于系统来定义1型号乳癌的方面：个本体在再次出现多种肝细胞自身抗本体时进入第1下一阶段，再次出现血糖异常时进入第2下一阶段，再次出现病征时进入第3下一阶段。一些多发肝细胞自身抗本体阴性的个本体，在1期和2期，方面较亦非快，并发展为复发的1型号乳癌。我们在此之后详细描述了一四组在首次探测到多种肝细胞自身抗本体抽样后数10年无乳癌的亦非亦非快方面者，这四组病症人数少，但形态非常明确。随后，我们发现肝细胞自身突变选择性CD8+T肝细胞化学反应在方面缓亦非快的病症里面基本不实际上，但在近期复发和长期实际上的乳癌病症里面很较易探测到。这有可能断定，与方面病症相对于，这些病症自身免疫化学反应的恒定增强。

早期科学研究断定，尽管恒定性T肝细胞(Treg)存量正常，但乳癌病症实际上一些基本功能缺陷，其里面包括对IL-2的化学反应能力降低。此外，乳癌病症里面的震荡CD4+T肝细胞有可能对恒定更具抵抗性，表现为震荡T肝细胞的抑止减弱，自然转化成的Treg和本粘液转化成的作用于Treg，以及突变经历的CD4+T肝细胞里面IL-2化学反应减弱。本科学研究的目的是详细描述了CD4+恒定性T肝细胞(Treg)在一个大亦非缓亦非快方面者里面的形态，他们的岁数为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX科学研究是一项以一些人相结合的纵向科学研究，在21岁以下胃癌的病症亲属里面检查1型号乳癌的危险考量。我们在此之后详细描述了长期缓亦非快方面者的形态，他们保持一致多重肝细胞自身抗本体阴性超过10年，但从未再次出现乳癌的针灸病征，亦非快性或非顺利完成性自身免疫。随后，10名之前保持一致无乳癌并愿意提供大量血液抽样的缓亦非快方面者纳入T和B肝细胞基本功能量化。在目前的科学研究里面，8名亦非快方面者(SP四组)，里面位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁相互间的肝细胞自身抗本体阴性。所有的自发性都受制于1型号乳癌方面的1期，尽管一些人随后失去了肝细胞自身抗本体对某些突变的阴性化学反应，然而，一名病症在此之后受制于2期数6年，但从未再次出现针灸病征，一名病症被检验为乳癌，该受试者72岁，在挖掘出实验抽样时，其HbA1c上升到53 mmol/mol(7%)，在数据量化里面对该作用于顺利完成了基本上评核。复合外周血单个核肝细胞(PBMCs)，引入多值流式肝细胞妖术和T肝细胞抑止试验性评核作用于里面Treg的阈值、表型号和基本功能。用到FlowSOM和CITRUS(聚类深入研究、表征和复出)顺利完成无监督聚类量化，评核Treg表型号。

结果：与身心健康作用于相对于，来自亦非快方面本体的潜意识CD4+T肝细胞的监督聚类辨识，激活的潜意识CD4+ Treg阈值提高，与糖皮质激素作用于的TNFR相关蛋白(GITR)传达提高有关。一名HbA1c上升的病症与方面缓亦非快者和冗余的对照四组相对于，Treg磬各有有所不同。基本功能量化断定，与身心健康作用于相对于，来自缓亦非快方面本体的Treg抑制的CD4+震荡T肝细胞抑止明显受损。表现为对震荡CD4+T肝细胞CD25和CD134传达的抑止提高。

平面图1 深入的表型号量化辨识，CD4+Treg变异号在亦非快方面详细描述符里面提高。由FlowSOM聚合的Treg过道，聚集在来自所有作用于的活CD4+CD45RA -肝细胞上。根据标明物传达深入研究出10个元簇:潜意识T肝细胞_1;潜意识T cell_2;潜意识T cell_3;潜意识T cell_4;CD49b潜意识T肝细胞;HLA-DR + GITR +潜意识T肝细胞;闪存Treg_1;闪存Treg_2;闪存Treg_3;和闪存Treg_4。(a)用到9个有所不同Treg标明聚合的10个元簇的MST。每个路由器亦然一个协同(100个协同)，更大的元协同(10个元协同)在路由器四组周围上色。每个路由器里面的糕点平面图回应单个标明的传达高级别。(b)每个元聚类的热平面图，以辨识整本体标明传达。(c, d)为HD四组(c)和SP四组(d)聚合平面图，以及FlowSOM识别系统的每个元簇的覆盖层。(e-l)比起原子量为每个metacluster箱子新线平面图(原子量> 0.05%)确定为HD和SP四组:闪存Treg_2 (e),闪存Treg_3 (f),闪存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +潜意识T肝细胞(h)、潜意识T cell_1(i),潜意识T cell_2 (j),潜意识T cell_3 (k) n d CD49b潜意识T肝细胞(l)。红色圆圈亦然**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon以此类推记号秩检验。此键适用于平面图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

平面图2 用到CITRUS的预测模型号确认，Treg阈值的提高是方面缓亦非快的标志。分级暂时性(a - f)和柑橘量化(g-k)非常SP自发性和冗余的HD自发性在CD4+CD45RA−T肝细胞上的相异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群本体的指标性平面图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR传达顺利完成复合，模拟FlowSOM群本体。(b) HD(黑点)和SP(星点)四组以及作用于SP 606(红色)里面CD25+ cd127的阈值汇总平面图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+暂时性邻域的箱子新线平面图;(c) HLA-DRloGITR−(闪存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(闪存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(闪存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+闪存T cell)。(g - i)棉花簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3传达强度着色，标记突出的簇被识别系统为SP和HD详细描述符相互间的有所不同。(j)箱子新线平面图辨识了在SP(星点)和HD(灰点)四组里面，CITRUS潜意识Treg_3和Treg_4的比起原子量(比不下)。(k)直方平面图辨识每个簇的表型号(粉红色)和Treg标明比起传达与文化背景传达(黄色);上列，闪存Treg_3;下面一行，闪存Treg_4。文化背景与所有其他簇里面标明的传达有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon以此类推记号秩检验

平面图3 与身心健康献血者相对于，方面缓亦非快者潜意识treg的GITR提高。每个潜意识CD4+T肝细胞元簇(潜意识T肝细胞_1;潜意识T cell_2;潜意识T cell_3;CD49b +潜意识T肝细胞;HLA-DR + GITR +潜意识T肝细胞;闪存Treg_2;闪存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)探测每个传达标明的变异。(a,b)来自HD (a)和S (b)详细描述符的传达热平面图(sp606不包括在内)。(c,d)潜意识Treg_4元簇里面所有HD(红色)、所有SP(黄色)和SP 606(红色)的FlowSOM GITR传达串联，辨识直方平面图(c)和汇总平面图(d)。Wilcoxon以此类推记号秩和检验，p< 0.07(红色)所有作用于包括，p< 0.05(黄色)作用于SP 606和冗余的HD不包括在测试里面。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里面GITR传达，从分级暂时性，从所有HD(红色)、所有SP(黄色)和SP 606(红色)串联，辨识直方平面图(e)和汇总平面图(f) *p< 0.05, Wilcoxon以此类推记号秩检验

平面图4 来自缓亦非快方面的CD4+ treg肝细胞控制震荡CD4+T肝细胞的能力降低。SP四组用黄色的新线和圆圈回应，HD四组用黑色的新线和圆圈回应，红色的新线/圆圈回应作用于sp606。用到CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T肝细胞顺利完成分选。CD4+CD25−(需要的话者)被标明为CFSE, Treg按通过观察的比不下反应物。用抗CD3 /28微珠再造肝细胞，人才培养3天内顺利完成流式肝细胞妖术探测。(a-d)与CD4+需要的话者比起应的treg人才培养(自本体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD需要的话者人才培养。(a,b,f) CFSE细胞分裂(a,e)和CFSE抑止倍数(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑止倍数。用到阴性对照(激活的声势浩大肝细胞仅有treg)计算抑止倍数。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差量化。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重非常测试

平面图5 震荡CD4+T肝细胞对缓亦非快方面的T肝细胞再造的抑止更敏感。SP四组用黄色的新线和圆圈回应，HD四组用黑色的新线和圆圈回应，红色的新线/圆圈回应作用于sp606。用到CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T肝细胞顺利完成分选。CD4+CD25−(需要的话者)被cfsel标明，treg按通过观察的比不下反应物。用抗CD3 /28微珠再造肝细胞，人才培养3天内顺利完成流式肝细胞妖术(CD25反染)和肝蛋白酶量化。HD Treg与HD、SP或sp606需要的话者共同人才培养。(a,b) CFSE细胞分裂(a)和CFSE抑止百分不下(b)。(c,d) CD25抑止百分不下(c)和CD134抑止百分不下(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共人才培养里面的传达。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差量化。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重非常测试

结论：我们得出的结论是，来自缓亦非快方面子的再造潜意识CD4+Treg在GITR传达里面获得了扩展和丰富，强调了进一步科学研究Treg在1型号乳癌风险个本体里面的异质性的更进一步。

标题出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28